CD1D Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402435-ACT

CD1D codifica o CD1d, uma molécula de apresentação de antígenos semelhante ao MHC de classe I não clássico, que se liga a antígenos lipídicos e glicolipídicos e os exibe na superfície celular para reconhecimento por células T invariantes natural killer (iNKT). Ao moldar a ativação das células iNKT e os programas de citocinas a jusante, o CD1d contribui para a vigilância imune, a tolerância e a regulação inflamatória em diversos tecidos. A apresentação de antígenos lipídicos dependente de CD1d cruza-se com o tráfego endossomal, o processamento de antígenos e vias de sinalização de linfócitos “inato-like” que influenciam a imunologia tumoral, a biologia das infeções e estados inflamatórios crónicos. Alterações na expressão ou na função de CD1D têm sido associadas a respostas imunes desreguladas observadas na autoimunidade, na inflamação metabólica e em microambientes tumorais.

CD1D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD1D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD1D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD1D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD1D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD1D. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD1D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD1D no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD1D em células tumorais com expressão de CD1D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.