CD163 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400435-ACT

CD163はSRCRファミリーに属するマクロファージ特異的なスカベンジャー受容体をコードし、ヘモグロビン‐ハプトグロビン複合体に結合してそのエンドサイトーシスを介在することで、ヘムの解毒を抗酸化および鉄代謝制御プログラムと結び付けています。CD163は単球や組織マクロファージに豊富に発現し、抗炎症性の分極と関連しており、IL-10応答性経路や自然免疫刺激に対する応答など、サイトカインシグナル伝達ネットワークを調節します。細胞外ヘモグロビンの除去を制御し炎症トーンを再編することにより、CD163は感染、動脈硬化、腫瘍随伴微小環境におけるマクロファージの活性化状態に影響を与えます。CD163の発現変動は、慢性炎症や免疫調節異常の研究において、マクロファージ浸潤および表現型の指標として頻繁に用いられます。

CD163 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD163の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD163 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD163 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD163転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD163の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD163遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD163依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD163発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD163経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。