Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD130/gp130: sc-400301-ACT

IL6ST code pour CD130/gp130, un co‑récepteur transducteur de signal exprimé de façon ubiquitaire et partagé par la famille de cytokines IL‑6, notamment IL6, IL11, LIF, OSM, CNTF et CT‑1. Après la liaison du ligand aux sous‑unités partenaires du récepteur, gp130 active les voies de signalisation JAK/STAT3 et STAT1 et interagit avec les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT pour réguler la survie, la prolifération et la différenciation cellulaires, les réponses de phase aiguë et l’homéostasie immunitaire. Une signalisation dépendante de gp130 dérégulée est impliquée dans l’inflammation chronique et l’auto‑immunité, la signalisation du microenvironnement favorisant les tumeurs, ainsi que des programmes hématopoïétiques et stromaux aberrants, faisant d’IL6ST un nœud clé pour la dissection des voies dans des modèles cellulaires humains.

CD130/gp130 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL6ST sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD130/gp130 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL6ST dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL6ST, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD130/gp130. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL6ST natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD130/gp130 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD130/gp130 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL6ST silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.