CD109 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402624-ACT

O CD109 codifica uma glicoproteína de superfície celular ancorada por GPI que atua como um correceptor modulando a sinalização do fator de crescimento transformante β (TGF-β), incluindo efeitos sobre a fosforilação de SMAD2/3 e a renovação/turnover do receptor. Ele é enriquecido em subpopulações de células epiteliais e mesenquimais e tem sido associado à regulação de programas de adesão celular, proliferação e diferenciação que se cruzam com a remodelação da matriz extracelular. Alterações na expressão de CD109 foram relatadas em múltiplos contextos tumorais e em microambientes inflamatórios, nos quais a atividade desregulada da via de TGF-β pode influenciar a transição epitélio-mesenquimal e fenótipos de evasão imune. Essas propriedades tornam o CD109 um alvo útil para investigar a comunicação cruzada entre receptores de superfície e o ajuste dependente do contexto de redes transcricionais dirigidas por TGF-β.

CD109 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD109 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD109 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD109 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD109, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD109. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD109 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD109 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD109 em células tumorais com expressão de CD109 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.