CCS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402130-ACT

A CCS humana (chaperona de cobre para a superóxido dismutase) é uma metalocaperona citosólica que entrega cobre à SOD1 e promove a sua maturação, apoiando a defesa antioxidante ao permitir a dismutação eficiente de radicais superóxido. Ao regular a metalização e a estabilidade da SOD1, a CCS contribui para a homeostase redox, a função mitocondrial e a resiliência celular ao stress oxidativo em diversos tipos celulares. Alterações no manuseio do cobre e na atividade do eixo SOD1/CCS são relevantes para a investigação em neurodegeneração e para estudos mais amplos de patologias associadas ao stress oxidativo, incluindo inflamação e disfunção metabólica. Assim, a expressão e a função da CCS são comumente investigadas em modelos que examinam sinalização dependente de cobre, proteostase e vias de resposta ao stress.

CCS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CCS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CCS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CCS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CCS em células tumorais com expressão de CCS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.