CCRK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409545-ACT

CDK20は細胞周期関連キナーゼ（CCRK）をコードしており、CCRKはセリン／スレオニンキナーゼとして、リン酸化依存的にCDK関連経路を制御することで、細胞周期の進行や増殖シグナルを調節します。CCRKはWnt/β-カテニン活性の調節や、成長・分化・細胞恒常性に影響するより広範な転写プログラムの制御とも関連づけられています。CDK20/CCRKの発現異常は、がん生物学における増殖制御の破綻やシグナル伝達ネットワークのバランス変化など、複数の疾患関連コンテキストで報告されています。そのため、CDK20はヒト細胞におけるキナーゼシグナル伝達、細胞周期制御、ならびに経路間クロストークにおける役割の観点から、頻繁に研究対象となっています。

CCRK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDK20の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CCRK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDK20 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDK20転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CCRKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDK20遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCCRK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDK20発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCCRK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。