Ccr1l1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419703

Panoramica

Ccr1l1 codifica una proteina correlata a un recettore per chemochine di tipo CCR1, prevista coinvolta nel traffico dei leucociti e nelle reti di segnalazione infiammatoria tipicamente governate dagli assi chemochina–recettore accoppiato a proteine G (GPCR). Sebbene sia meno caratterizzata rispetto ai membri canonici della famiglia CCR, Ccr1l1 potrebbe influenzare la migrazione guidata dalle chemochine, la localizzazione delle cellule immunitarie e le vie a valle legate al rimodellamento dell’actina e alla regolazione dei circuiti di citochine/chemochine. Questi processi sono centrali nelle risposte immunitarie innate e adattative e sono spesso chiamati in causa in modelli di malattia infiammatoria, infezione e dinamiche del microambiente tumorale–immunitario. Ccr1l1 nel topo rappresenta quindi un utile punto di partenza per esplorare in vivo e in sistemi di cellule primarie la biologia adiacente ai recettori delle chemochine e i meccanismi di immunoregolazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ccr1l1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccr1l1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccr1l1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccr1l1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ccr1l1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccr1l1 per lo studio della segnalazione di Ccr1l1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccr1l1 critici per la funzione di Ccr1l1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccr1l1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ccr1l1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ccr1l1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccr1l1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ccr1l1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ccr1l1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccr1l1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccr1l1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.