CCK-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-427959-ACT

O gene Ptk7 de camundongo codifica a proteína tirosina quinase 7 (também conhecida como CCK-4), um receptor atípico na rede Wnt/polaridade celular planar (PCP) que ajuda a coordenar a migração celular direcional, a polaridade tecidual e os movimentos morfogenéticos. A PTK7 modula a sinalização Wnt não canônica por meio de interações com componentes centrais da PCP, influenciando a remodelação do citoesqueleto, a adesão celular e o comportamento coletivo das células durante o desenvolvimento. A desregulação da expressão ou da sinalização de PTK7 tem sido associada a fenótipos alterados relacionados à invasão e à metástase em modelos de câncer e a defeitos no desenvolvimento do tubo neural e cardiovascular em estudos genéticos. Como regulador de sinalização associado à superfície celular, a PTK7 é frequentemente utilizada para investigar o crosstalk entre as vias Wnt/PCP, a sinalização por receptores e programas transcricionais dependentes de polaridade.

CCK-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ptk7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CCK-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ptk7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ptk7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CCK-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ptk7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CCK-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CCK-4 em células tumorais com expressão de Ptk7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.