CBX7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402903-ACT

CBX7（chromobox 7）はポリコーム群（Polycomb group）タンパク質であり、H3K27me3を認識することでカノニカルPRC1内のクロマチンリーダーとして機能し、安定した転写抑制の維持に寄与します。ポリコームによるエピジェネティック制御を介して、CBX7は細胞周期制御、系譜決定、細胞老化、および細胞アイデンティティ・プログラムの長期的維持に影響を与えます。CBX7の発現変化やPRC1活性の破綻は、複数のがんで見られる異常な遺伝子サイレンシング・ネットワークや、発生・老化関連の表現型と関連づけられています。核内クロマチン制御因子として、CBX7は転写メモリーやクロマチン凝縮を司る経路の研究で広く用いられています。

CBX7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CBX7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CBX7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CBX7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCBX7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CBX7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCBX7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCBX7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCBX7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCBX7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。