CBP80 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403736-ACT

NCBP1は、ヒトのキャップ結合複合体（cap-binding complex）のサブユニットであるCBP80をコードしており、新生のRNAポリメラーゼII転写産物に付加される7-メチルグアノシンキャップを認識する核内キャップ結合複合体の中核構成因子です。CBP80は、pre-mRNAスプライシング、3′末端形成、核外輸送、翻訳のパイオニアラウンドなど、mRNA生合成の複数段階を統括し、ナンセンス変異依存mRNA分解（nonsense-mediated mRNA decay）などの監視経路とも連携します。これらの働きを通じて、NCBP1は増殖細胞および分化細胞の両方の状態において、転写産物量をRNA品質管理およびプロテオーム恒常性へと結び付けています。キャップ依存的なRNAプロセシングと核外輸送の破綻は、がん化に伴う転写プログラムや神経発生の表現型と広く関連するため、CBP80は疾患関連モデルにおけるRNA代謝を研究する上で有用な結節点となります。

CBP80 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NCBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CBP80 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NCBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNCBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CBP80の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNCBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCBP80依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNCBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCBP80経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。