Cbl-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407624-NIC

CBLCはCbl-3をコードしており、Cbl-3はRING型のE3ユビキチンリガーゼで、活性化された受容体型および非受容体型チロシンキナーゼのユビキチン化と、エンドサイトーシスによるダウンレギュレーションにおいてアダプターとして機能します。Cbl-3は、TKB/SH2依存的にリン酸化チロシン（ホスホチロシン）モチーフへ結合し、さらにユビキチン結合酵素（E2）をリクルートすることで、MAPK/ERKやPI3K/AKTネットワーク成分を含む、増殖因子受容体や免疫受容体シグナル伝達に関連する経路におけるシグナルの強度と持続時間の調節に寄与します。CBLCの活性は、受容体のトラフィッキング、プロテオスタシス、ならびにリン酸化依存性シグナル伝達カスケードの負のフィードバック制御に関与します。CBLファミリーのユビキチンリガーゼとその基質の機能異常は、がん化に関わるシグナル状態の変化や造血系シグナル伝達の攪乱と関連づけられており、CBLCはシグナル恒常性の分子機構を解析するうえで有用な遺伝子座です。

Cbl-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CBLC 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CBLC内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CBLCの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CBLCが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。