CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419722-ACT

O gene murino **Cnr1** codifica o receptor canabinoide 1 (CB1/CNR1), um GPCR acoplado a **Gi/o** que responde a endocanabinoides como a **anandamida** e o **2-araquidonoilglicerol** para regular a transmissão sináptica e a sinalização neuroendócrina. A ativação de CB1 normalmente suprime a adenilil ciclase e a sinalização **cAMP/PKA**, modula as vias **MAPK/ERK** e controla a atividade de canais iônicos para ajustar finamente a liberação de neurotransmissores e a excitabilidade neuronal. No SNC, o CNR1 é central para processos neuromodulatórios, incluindo recompensa, nocicepção, apetite, responsividade ao estresse e aprendizagem e memória, além de funções adicionais em sinalização metabólica periférica e relacionada ao sistema imune. Alterações na sinalização de CNR1 são frequentemente estudadas no contexto de fenótipos neuropsiquiátricos, vias relacionadas à dor e desregulação metabólica em modelos murinos.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cnr1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cnr1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cnr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cnr1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 em células tumorais com expressão de Cnr1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.