Partículas Lentivirales de Activación (h) caveolin-1: sc-400102-LAC

CAV1 codifica la caveolina-1, una proteína integral de membrana con función de andamiaje que organiza las caveolas y coordina la transducción de señales en la membrana plasmática. La caveolina-1 regula la endocitosis, la homeostasis de lípidos y colesterol y la mecanotransducción, y modula vías que incluyen la señalización de integrinas/FAK, la actividad de quinasas de la familia Src, la señalización endotelial del óxido nítrico y la remodelación vinculada a TGF-β. A través de sus efectos sobre el tráfico de receptores y la composición de los microdominios de membrana, la caveolina-1 influye en la migración celular, la función de barrera y las respuestas al estrés. La expresión desregulada de CAV1 y la dinámica de las caveolas se han asociado con fenotipos cardiovasculares y metabólicos, procesos relacionados con la fibrosis y comportamientos celulares asociados a tumores, lo que respalda su amplia utilidad como nodo de vía en estudios de biología celular y molecular.

Las partículas de activación lentiviral caveolin-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CAV1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral caveolin-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CAV1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de caveolin-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CAV1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.