caveolin-1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419479-NIC

マウスの Cav1 は、カベオリン-1をコードしています。カベオリン-1はカベオラの主要な構造タンパク質であり、膜マイクロドメインの足場として機能するとともに、細胞膜におけるシグナル伝達を統合・制御します。カベオリン-1はエンドサイトーシスやメカノトランスダクションを調節し、コレステロール恒常性および脂質輸送に影響を与えるほか、Srcファミリーキナーゼ、eNOS/NOシグナル、TGF-β、インテグリン依存性のフォーカルアドヒージョン動態などの経路に由来するシグナル出力を形成します。これらの役割を通じて、Cav1は細胞骨格の再構築、細胞移動、細胞外マトリックスとの相互作用に影響し、これらは血管生物学、線維化モデル、腫瘍微小環境の研究で一般的に解析対象となります。カベオリン-1の発現量や局在の変化は、内皮機能の破綻、脂肪組織や代謝に関わる表現型、ならびにがん研究における増殖・浸潤の文脈依存的な変化と関連づけられています。

caveolin-1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cav1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cav1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cav1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cav1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。