caveolin-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400102-NIC

CAV1はカベオリン1をコードしており、カベオラの主要な構造要素として、シグナル伝達複合体の足場となり、コレステロールに富む膜マイクロドメインを組織化します。カベオリン1は、受容体型チロシンキナーゼシグナル、Gタンパク質共役型受容体（GPCR）経路、インテグリン依存性のメカノトランスダクション、ならびに内皮一酸化窒素（NO）シグナルを調節し、エンドサイトーシス、脂質恒常性、細胞骨格ダイナミクスに影響を与えます。これらの機能を通じて、細胞移動、増殖、ストレス応答に関与し、CAV1の発現量や局在の変化は、心血管・代謝表現型に加えて腫瘍関連のシグナル伝達プログラムとも関連づけられています。膜のオーガナイザーとして、カベオリン1はカベオラ生物学および膜近傍のシグナル伝達を研究するためのマーカー、ならびに機能的ハブとして広く用いられています。

caveolin-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAV1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAV1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAV1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAV1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。