cathepsin A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402785-ACT

CTSA codifica a catepsina A, uma serina carboxipeptidase lisossomal que também atua como o componente “proteína protetora” de um complexo multienzimático com a neuraminidase 1 e a β-galactosidase, sustentando a estabilidade dessas enzimas e o seu tráfego para os lisossomos. Por meio das suas atividades de desacetilase e carboxipeptidase, a catepsina A contribui para a renovação (turnover) de glicoproteínas e glicolipídios e ajuda a regular a proteostase mediada por lisossomos no sistema endolisossomal. A disfunção ligada ao CTSA perturba a homeostase lisossomal e o catabolismo de substratos, conectando o gene à biologia das doenças de armazenamento lisossomal e a efeitos subsequentes nas respostas celulares ao estresse. Esses processos tornam o CTSA relevante para estudos mecanísticos da função lisossomal, do processamento proteico e da remodelação metabólica em modelos de células humanas.

cathepsin A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTSA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cathepsin A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTSA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTSA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cathepsin A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTSA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cathepsin A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cathepsin A em células tumorais com expressão de CTSA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.