caspase-8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400147-NIC

CASP8はカスパーゼ8をコードしており、カスパーゼ8はイニシエーター・カスパーゼとして、下流のエフェクター・カスパーゼをプロテアーゼ的に活性化することで、デスレセプターシグナルをアポトーシスの実行段階へと結び付けます。これはFASやTNFR1などのTNFRSF受容体によって媒介される外因性アポトーシスの中核構成要素であり、さらにインフラマソーム間のクロストークやサイトカイン処理を制御する自然免疫経路とも接続しています。カスパーゼ8の活性は、RIPK1/RIPK3シグナルおよびcFLIP依存的な複合体形成を調節することで、アポトーシス、ネクロプトーシス、ならびに炎症性細胞死のバランスに影響を与えます。CASP8の機能不全（調節異常）は、免疫恒常性の変化、リンパ球アポトーシスの不全、ならびにデスレセプターリガンドに対する感受性に影響する腫瘍細胞の生存機構と関連付けられています。

caspase-8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CASP8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CASP8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CASP8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CASP8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。