caspase-8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400147-ACT

ヒトCASP8はカスパーゼ8をコードしており、デスレセプターの活性化を下流のカスパーゼカスケードおよび制御された細胞死プログラムへと結び付ける開始因子型のシステインプロテアーゼである。CASP8はDISC（death-inducing signaling complex）で機能して外因性アポトーシスを伝播し、FADD、cFLIP、RIPK1、RIPK3との相互作用を介してネクロプトーシス制御とも連関し、炎症反応やストレス応答を形作る。さらにCASP8は、TNFRおよびFas経路の下流における免疫シグナル伝達や細胞運命決定にも影響し、状況依存的にサイトカイン産生や生存に対して作用する。カスパーゼ8の活性または発現の異常は、アポトーシス感受性の変化、免疫機能の撹乱、ならびにがんに関連する細胞死回避機構と関連付けられている。

caspase-8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CASP8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

caspase-8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CASP8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCASP8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性caspase-8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCASP8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcaspase-8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCASP8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcaspase-8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。