CARP Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401842-LAC

L’ANKRD1 umano codifica la cardiac ankyrin repeat protein (CARP), un cofattore trascrizionale sensibile allo stress e allo stiramento che collega l’integrità sarcomerica alla regolazione genica nucleare. CARP partecipa ai programmi di meccanotrasduzione nel muscolo striato, modulando l’espressione di geni contrattili e della matrice extracellulare e coordinando le risposte di rimodellamento a variazioni del carico. Interagisce con componenti strutturali e di segnalazione nella regione del disco Z/banda I e si interfaccia con vie che governano la miofibrillogenesi, la segnalazione ipertrofica e le risposte cellulari allo stress. Un’espressione e/o funzione deregolata di ANKRD1 è stata associata a fenotipi di rimodellamento correlati alla cardiomiopatia, rendendolo un bersaglio rilevante per studi sulle reti geniche cardiache, sulla differenziazione muscolare e su stati trascrizionali associati a malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale CARP (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ANKRD1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CARP (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ANKRD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CARP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ANKRD1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.