CapZ-α1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405348-ACT

CAPZA1 codifica a CapZ-α1, uma proteína de capeamento da extremidade farpada dos filamentos de actina que atua em parceria com subunidades β para regular a dinâmica de polimerização da actina, a estabilidade dos filamentos e a remodelação do citoesqueleto. Ao controlar a montagem de actina na borda líder e nas fibras de stress, a CapZ-α1 influencia a forma celular, a adesão e a motilidade, integrando-se a vias que governam a renovação das adesões focais e a mecanotransdução. A atividade de CAPZA1 também está ligada à organização da actina sarcomérica e contrátil, sustentando estudos da arquitetura do citoesqueleto em estados celulares diferenciados e proliferativos. O capeamento e a remodelação desregulados da actina são frequentemente implicados em fenótipos relevantes para a invasão oncogénica, a integridade estrutural dos cardiomiócitos e outras doenças em que alterações na mecânica do citoesqueleto contribuem para a patologia.

CapZ-α1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAPZA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CapZ-α1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAPZA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAPZA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CapZ-α1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAPZA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CapZ-α1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CapZ-α1 em células tumorais com expressão de CAPZA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.