CAML Double Nickaseプラスミド (h): sc-403690-NIC

CAMLGは、カルシウム調節性シクロフィリンリガンド（CAML）をコードしている。CAMLは小胞体（ER）膜に関連するタンパク質で、細胞内Ca²⁺シグナル伝達および膜タンパク質生合成の調節因子として機能する。CAMLは、受容体刺激によるカルシウム流入、ER恒常性、ならびに一部の膜タンパク質の輸送や安定化に関わる過程に関与し、その結果として細胞の活性化・生存・ストレス応答を制御する下流経路に影響を及ぼす。免疫細胞シグナル伝達の文脈や、プロテオスタシスを形作る一般的なER関連の制御ネットワークにおいて研究されてきた。CAML関連機構と交差するカルシウム恒常性の破綻やERストレス経路の異常は、免疫機能障害やがんに伴うシグナル伝達の適応など、多様な疾患生物学と関連している。

CAML ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAMLG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAMLG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAMLGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAMLGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。