CaMKV CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404961-ACT

CAMKV は、CaMKV（Ca2+/カルモジュリン依存性プロテインキナーゼ様）をコードしており、神経細胞のシグナル伝達や、活動依存的な遺伝子発現制御に関与するとされる CaMK ファミリーの非典型的メンバーです。CaMKV は、シナプス可塑性、神経突起の発達、細胞骨格ダイナミクスに影響するカルシウム／カルモジュリン応答性のプロセスと関連しており、上流のカルシウム流入を下流の転写プログラムと統合します。CAMKV の発現やシグナル伝達の異常は、神経発達および神経精神疾患様の表現型と関連づけられており、神経細胞の結合性や興奮性を形作る分子機構の研究において重要です。したがって、ヒト CAMKV は、神経モデルおよび関連する細胞システムにおけるカルシウム依存性経路を解析するための有用な標的となります。

CaMKV CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAMKVの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CaMKV CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAMKV 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAMKV転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CaMKVの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAMKV遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCaMKV依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAMKV発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCaMKV経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。