CAMK2A/CaMKII alpha Double Nickaseプラスミド (h): sc-400228-NIC

CAMK2Aは、Ca2+/カルモジュリン依存性プロテインキナーゼII（CaMKIIα）のαサブユニットをコードしている。CaMKIIαはセリン/スレオニンキナーゼであり、細胞内Ca2+の一過性上昇を、シナプス伝達や活動依存的可塑性に重要なリン酸化反応へと変換する。CaMKIIαは自己リン酸化によってキナーゼ活性を持続させ、イオンチャネル、受容体、足場タンパク質をリン酸化することでグルタミン酸作動性シグナル伝達を調節し、Ca2+シグナルを細胞骨格の再編成や遺伝子発現プログラムと統合する。このキナーゼは学習・記憶に影響する神経細胞シグナル伝達経路の中核ノードであり、CAMK2A活性の変化は、実験モデルにおいて神経発達・精神神経学的表現型や発作関連機構と関連づけられている。そのためCAMK2Aは、ヒト神経細胞システムにおける興奮性シナプスの制御、カルシウム依存的シグナル伝達ダイナミクス、ならびに下流のリン酸化ネットワークを研究するための分子ツールとして広く用いられている。

CAMK2A/CaMKII alpha ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAMK2A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAMK2A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAMK2Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAMK2Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。