CaM III Double Nickaseプラスミド (h): sc-400953-NIC

ヒトCALM3は、カルモジュリンIII（CaM III）をコードしています。CaM IIIは全身の多様な組織で発現するCa2+センサーであり、さまざまな標的に結合して一過性のカルシウムシグナルを統合された細胞応答へと変換します。CaM IIIは、CaMKおよびカルシニューリン／NFATシグナル伝達、環状ヌクレオチド代謝、ならびにイオンチャネルのゲーティングなどの重要な過程を制御し、その結果として興奮—収縮連関、シナプス活動、分泌、細胞周期の進行に影響を及ぼします。リン酸化制御や転写プログラムの調節を介して、カルモジュリン依存性経路はミトコンドリア機能やストレス応答を形作り、不整脈形成、神経発達表現型、増殖シグナルに関する研究で頻繁に解析対象となっています。したがって、カルシウム恒常性の変化やカルモジュリンネットワークの機能不全は、心血管疾患および神経疾患の機序モデル、ならびに多様な細胞種における経路マッピングにおいて重要な関連性を持ちます。

CaM III ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CALM3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CALM3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CALM3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CALM3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。