calsequestrin 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403375-NIC

CASQ1は、骨格筋の筋小胞体（サルコプラズミックレティiculum：SR）内腔に局在する高容量のCa²⁺結合タンパク質であるカルセクエストリン1をコードしており、Ca²⁺を緩衝して興奮収縮連関の形成に寄与します。内腔側Ca²⁺の利用可能性や、リアノジン受容体（RYR1）を介したCa²⁺放出の動態（キネティクス）を調節することで、カルセクエストリン1はCa²⁺恒常性と、協調した筋収縮・弛緩サイクルに貢献します。CASQ1の機能や発現が変化すると、細胞内Ca²⁺シグナル伝達や、異常なCa²⁺放出に関連するストレス応答が乱れ、収縮性の低下や筋機能障害の表現型への感受性増大につながり得ます。筋小胞体におけるCa²⁺制御の中心的因子として、CASQ1は筋線維におけるCa²⁺依存性シグナル、プロテオスタシス、代謝リモデリングの機序研究に関連します。

calsequestrin 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CASQ1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CASQ1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CASQ1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CASQ1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。