calsequestrin 1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419471-ACT

マウスの Casq1 は、筋小胞体（sarcoplasmic reticulum：SR）内腔に存在する高容量の Ca²⁺結合タンパク質であるカルセクエストリン1（calsequestrin 1）をコードしており、Ca²⁺を緩衝するとともに、速筋型骨格筋における興奮収縮連関の形成に寄与します。CASQ1 は、リアノジン受容体のシグナル伝達および SR のイオン取り扱い機構と協調して Ca²⁺の貯蔵と放出を組織化することで、カルシウム恒常性、収縮機能、ならびに活動依存的な適応に関与します。CASQ1 の機能や発現の変化は、細胞内 Ca²⁺ダイナミクスの破綻、ストレス誘発性の筋線維損傷への感受性増大、そしてミオパチーや悪性高熱様反応の研究に関連する筋生理学的表現型と関連づけられています。そのため Casq1 は、マウスモデルや改変細胞システムにおいて、SR の Ca²⁺緩衝、Ca²⁺依存性シグナル伝達、ならびに骨格筋疾患の機序を検討するための有用な標的となります。

calsequestrin 1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Casq1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

calsequestrin 1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Casq1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCasq1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性calsequestrin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCasq1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcalsequestrin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCasq1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcalsequestrin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。