Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Calretinin Double Nickaseプラスミド (h): sc-401389-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Calretinin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Calretininダブルニカースプラスミド（h）およびCalretininダブルニカースプラスミド（h2）は、CALB2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Calretinin 抗体 (H-5): sc-365956
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Calretinin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401389-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calretinin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401389-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトCALB2は、細胞内Ca2+を緩衝し、カルシウム依存的な興奮性、シナプス伝達、ならびに活動依存的な遺伝子発現制御を形作るEFハンド型カルシウム結合タンパク質であるカルレチニンをコードします。カルレチニンは特定の介在ニューロン集団に豊富に存在し、さらに一部の末梢組織でも発現しており、Ca2+で制御されるシグナル伝達を介して細胞骨格ダイナミクスや小胞輸送に寄与します。CALB2は、神経細胞サブタイプの同定や中皮分化の分子マーカーとして広く用いられており、その発現は神経回路の組織化や上皮系譜プログラムの研究と結び付けられています。CALB2発現の異常やカルシウム恒常性の変化は、神経発達・神経変性の文脈や、特定組織における腫瘍生物学とも関連付けられており、機序解明研究における有用性を支持します。
Calretinin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CALB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CALB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CALB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CALB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。