Calretinin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401389-ACT

ヒトCALB2は、細胞質に局在するEFハンド型のカルシウム結合タンパク質であるカルレチニンをコードしており、興奮性細胞や神経内分泌様細胞における細胞内Ca2+の緩衝能（バッファリング）およびシグナル伝達を調節します。カルレチニンは、活動依存的なカルシウム動態、シナプスの興奮性、さらにカルシウムフラックスを神経分化や生存経路へと結び付ける下流の転写プログラムに影響を与えます。研究用途では、CALB2発現は特定の神経細胞サブタイプや介在ニューロン系譜を定義する指標として広く用いられており、カルシウム依存的なネットワーク挙動の機能解析にも利用されています。CALB2の発現異常は、神経発生シグナルの変調や腫瘍に関連する系譜状態など、複数の疾患関連コンテキストで報告されており、CALB2によって駆動されるカルシウムシグナル表現型の機構解明研究が促進されています。

Calretinin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CALB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calretinin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CALB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCALB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calretininの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCALB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalretinin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCALB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalretinin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。