Calretinin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401389-ACT

O gene humano **CALB2** codifica a **calretinina**, uma proteína citossólica de ligação ao cálcio do tipo **EF-hand** que modula o tamponamento intracelular de **Ca2+** e a transdução de sinais em células excitáveis e semelhantes a neuroendócrinas. A calretinina influencia a dinâmica do cálcio dependente da atividade, a excitabilidade sináptica e programas transcricionais a jusante que acoplam o fluxo de cálcio a vias de diferenciação e sobrevivência neuronal. Em contextos de pesquisa, a expressão de **CALB2** é amplamente utilizada para definir subtipos neuronais distintos e linhagens de interneurónios, além de apoiar estudos funcionais do comportamento de redes dependente de cálcio. Alterações na regulação de **CALB2** foram relatadas em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo sinalização neurodesenvolvimental alterada e estados de linhagem associados a tumores, motivando estudos mecanísticos de fenótipos de sinalização de cálcio impulsionados por **CALB2**.

Calretinin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CALB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calretinin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CALB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CALB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calretinin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CALB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calretinin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calretinin em células tumorais com expressão de CALB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.