Calregulin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400775-ACT

ヒトCALRはカルレティキュリンをコードしており、カルレティキュリンは多機能な小胞体（ER）シャペロンであると同時に、高容量のCa2+結合タンパク質でもあります。カルネキシン／カルレティキュリン・サイクルおよびER関連プロセスを介して、糖タンパク質のフォールディング品質管理を支えます。カルレティキュリンは、細胞内カルシウム恒常性やERストレス応答シグナル伝達、さらにMHCクラスIへのペプチド搭載に寄与することで抗原提示にも影響し、プロテオスタシスを免疫関連経路と結び付けます。ER以外でも、インテグリンや他の膜関連複合体との相互作用を通じて、細胞接着やシグナル伝達の制御に関与することが示されています。CALRの発現や機能の破綻は、ERストレス、免疫原性細胞死、骨髄系悪性腫瘍に関連する機構のモデルにおいて重要であり、プロテオスタシスや炎症性シグナル伝達の研究での利用を支持します。

Calregulin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CALRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calregulin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CALR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCALR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calregulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCALR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalregulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCALR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalregulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。