Calpain 7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405085-ACT

O CAPN7 humano codifica a calpaína 7, uma protease de cisteína intracelular não lisossomal da família das calpaínas, que contribui para a proteólise regulada e para a proteostase. Eventos de clivagem mediados por calpaínas podem remodelar complexos do citoesqueleto e associados à membrana, influenciando processos como o tráfego intracelular, a progressão do ciclo celular e cascatas de sinalização responsivas ao estresse. Por meio do processamento de substratos dependente do contexto, a atividade de CAPN7 pode interagir com vias que governam a adesão e a motilidade celular e com redes mais amplas de controle de qualidade de proteínas. Sinalização proteolítica desregulada e desequilíbrio da proteostase são comumente observados no câncer e na neurodegeneração, tornando o CAPN7 um alvo relevante para estudos mecanísticos da regulação proteolítica em células humanas.

Calpain 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAPN7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calpain 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAPN7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAPN7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calpain 7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAPN7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calpain 7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calpain 7 em células tumorais com expressão de CAPN7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.