The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
Calpain 6双切口酶质粒(m): sc-419444-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Calpain 6 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Calpain 6双切酶质粒（m）和Calpain 6双切酶质粒（m2）编码针对Capn6的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Calpain 6双切口酶质粒(m) | sc-419444-NIC | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Capn6 编码 calpain 6（CAPN6），属于 calpain 家族中的一种非典型成员，缺乏关键的催化活性，但仍可作为细胞骨架中的调控性支架发挥作用。CAPN6 影响微管稳定性、肌动蛋白重塑以及细胞运动性，因此与调控细胞骨架动态、囊泡运输和细胞分化程序的通路相关。在发育组织和肌生成相关情境中，CAPN6 与增殖与分化状态的调控有关，使其在组织形态发生与修复研究中具有参考价值。已有研究报道 CAPN6 表达改变与疾病相关的重塑表型相关，因此可在纤维化、癌细胞侵袭以及神经肌肉或发育异常等模型中开展研究，但不暗示任何临床结局。
Calpain 6 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Capn6 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Capn6内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Capn6的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Capn6基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。