Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calpain 6: sc-407700-ACT

Le gène humain **CAPN6** code la **calpaïne 6**, un membre atypique de la famille des calpaïnes présentant une activité protéase limitée, voire absente, et agissant principalement comme régulateur de l’organisation du cytosquelette. La calpaïne 6 est associée à la stabilisation des microtubules, au contrôle de la forme cellulaire et à la modulation de la motilité et de l’adhérence cellulaires, des processus qui recoupent les voies impliquées dans la différenciation et le remodelage tissulaire. L’expression de **CAPN6** est fréquemment étudiée dans le contexte de programmes de développement et de réponses au stress cellulaire, où les modifications de la dynamique du cytosquelette influencent les phénotypes prolifératifs et migratoires. Une dérégulation de **CAPN6** a été rapportée dans de multiples signatures transcriptomiques associées à des maladies, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour l’étude du remodelage dépendant du cytosquelette et des états de croissance aberrants.

Calpain 6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAPN6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calpain 6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAPN6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAPN6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calpain 6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAPN6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calpain 6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calpain 6 dans les cellules tumorales présentant une expression de CAPN6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.