Calpain 5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403881-NIC

CAPN5は、カルパインファミリーに属するカルシウム依存性システインプロテアーゼであるカルパイン5をコードしており、細胞内基質の制御されたプロテオリシス（タンパク質分解）を調節します。カルパイン活性は、カルシウムフラックスを、細胞接着・遊走・生存プログラムに影響するプロテアーゼ依存的なプロセシング事象に結び付けることで、細胞骨格のリモデリング、膜動態、シグナル伝達に寄与します。CAPN5は網膜の生物学および炎症性シグナル伝達との関連が示されており、遺伝的変異は遺伝性硝子体網膜症や、眼組織における異常な免疫様応答と関連しています。これらの特徴により、CAPN5はヒト細胞モデルにおいて、カルシウム誘導性のプロテオスタシス、ストレス応答、ならびに組織特異的な変性機構を研究するための有用なノードとなります。

Calpain 5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAPN5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAPN5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAPN5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAPN5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。