Plásmido CRISPR de Activación (h) Calpain 5: sc-403881-ACT

CAPN5 codifica calpaína 5, una proteasa de cisteína dependiente de calcio implicada en la proteólisis regulada que modula la dinámica del citoesqueleto, el tráfico de membranas y la transducción de señales. La actividad de las calpaínas puede influir en vías relacionadas con la motilidad celular, la adhesión y las respuestas al estrés mediante el clivaje limitado de proteínas estructurales y de señalización. La disfunción de las proteasas calpaína se ha asociado con procesos inflamatorios y neurodegenerativos, y se han estudiado variaciones en CAPN5 en relación con fenotipos de degeneración retiniana. Por lo tanto, la modulación de la expresión de CAPN5 es útil para analizar eventos de remodelación impulsados por proteasas y programas de señalización sensibles al calcio en células humanas.

Calpain 5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAPN5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Calpain 5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAPN5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAPN5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Calpain 5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAPN5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Calpain 5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Calpain 5 en células tumorales con expresión de CAPN5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.