Calpain 10 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423852-ACT

Capn10はカルパイン10（calpain 10）をコードしており、カルシウム依存性の非リソソーム性システインプロテアーゼです。細胞内基質の限定的なプロテオリシスを調節することで、タンパク質のターンオーバー、細胞骨格の再構築、シグナル伝達を制御します。マウス細胞では、カルパイン10の活性がミトコンドリア機能、酸化ストレス応答、代謝恒常性と関連づけられており、インスリンシグナル伝達やグルコース利用を統合的に制御する経路に影響を与えます。CAPN10の発現や活性の異常は、インスリン感受性やエネルギーバランスの変化などの代謝表現型と関連していることが報告されており、糖尿病関連メカニズムの研究における重要性を支持しています。標的タンパク質の切断によってシグナルネットワークを再編し得るプロテアーゼとして、カルパイン10は脂肪細胞の生物学、骨格筋代謝、ストレス誘導性リモデリングといった文脈でしばしば解析されます。

Calpain 10 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Capn10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calpain 10 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Capn10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCapn10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calpain 10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCapn10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalpain 10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCapn10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalpain 10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。