Calnexin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400154-NIC

ヒトCANXはカルネキシンをコードしており、カルネキシンは小胞体（ER）膜に存在するレクチン型シャペロンとして、単グルコシル化されたN結合型糖鎖に結合し、新生糖タンパク質のフォールディング促進と品質管理に寄与します。カルネキシンはERp57とともにカルネキシン／カルレティキュリン・サイクル内で機能し、ジスルフィド結合形成の制御、誤折り畳みクライアントの保持、ならびに分泌経路における輸送の決定を協調的に担います。ERプロテオスタシスにおける役割を通じて、CANXは小胞体ストレス応答（UPR）、小胞体関連分解（ERAD）、そして抗原提示や細胞生存プログラムを再編し得る細胞ストレスシグナル伝達と交差します。カルネキシン依存的なフォールディングの破綻やERストレスは、タンパク質ミスフォールディング疾患、代謝性炎症、腫瘍における分泌需要の増大といった文脈で頻繁に研究されており、CANXは機序解明のための経路解析における機能的ハブとなります。

Calnexin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CANX 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CANX内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CANXの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CANXが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。