Calnexin CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-419436-ACT-2

マウスのCanxはカルネキシンをコードしており、カルネキシンは小胞体（ER）膜に局在するシャペロンとして、単一のグルコースを持つN結合型糖鎖（モノグルコシル化N結合型糖鎖）に結合し、カルネキシン／カルレティキュリン回路の中で新生糖タンパク質の折り畳み、組み立て、ならびにER内での保持を促進する。カルネキシンは、ERp57や関連する酸化還元酵素と協調することで小胞体の品質管理とプロテオスタシスに関与し、ジスルフィド結合形成、ER関連分解（ERAD）、およびERストレス時の折り畳み不全タンパク質応答（UPR）に影響を及ぼす。Canx依存的な折り畳み監視が破綻すると分泌経路の恒常性が乱れ、糖タンパク質成熟が重要となるマウスモデルにおいて神経発生、髄鞘形成、免疫機能に関連する表現型と結び付けられてきた。Canxの遺伝子編集は、糖タンパク質生合成の機構、小胞体ストレスシグナル伝達、ならびに膜タンパク質・分泌タンパク質の細胞種横断的かつ疾患関連状況での輸送を解明する研究を支える。

Calnexin CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Canxの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calnexin CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Canx 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCanx転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calnexinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCanx遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalnexin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCanx発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalnexin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。