Calgranulin B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400801-ACT

S100A9 kodiert Calgranulin B, ein kalziumbindendes Protein der S100-Familie, das mit S100A8 (Calprotectin) ein Heterodimer bildet und in der angeborenen Immunität als „damage-associated molecular pattern“ (DAMP) wirkt. Calgranulin B ist in Neutrophilen und entzündlichen Monozyten reichlich vorhanden, reguliert die Adhäsion und Migration von Leukozyten und verstärkt über Rezeptoren wie TLR4 und RAGE die Produktion von Zytokinen und Chemokinen. Seine Aktivität ist mit NF-κB- und MAPK-Signalwegen, oxidativen Stressantworten und der Umgestaltung des myeloiden Entzündungsmilieus verknüpft. Eine fehlregulierte S100A9-Expression wird häufig bei chronisch-entzündlichen Erkrankungen, in der tumorassoziierten Myeloidbiologie und bei infektionsbedingter Immunopathologie als Marker und Vermittler entzündlicher Aktivierung untersucht.

Calgranulin B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100A9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Calgranulin B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100A9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100A9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Calgranulin B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100A9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Calgranulin B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Calgranulin B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100A9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.