Plásmido Doble Nickase (h) CAF-1 p150: sc-402472-NIC

CHAF1A codifica la subunidad p150 del factor de ensamblaje de cromatina 1 (CAF-1), una chaperona de histonas que deposita H3–H4 sobre el ADN recién sintetizado durante la fase S y tras el daño en el ADN. CAF-1 p150 coordina el ensamblaje de nucleosomas acoplado a la replicación, la herencia epigenética y la restauración de la estructura de la cromatina después de la reparación, vinculando la dinámica de la cromatina con la estabilidad del genoma. A través de interacciones con PCNA y con la maquinaria de replicación/reparación, CHAF1A influye en la replicación del ADN, la recombinación homóloga y las vías de señalización de los puntos de control. La desregulación de la actividad de CAF-1 se asocia con estrés replicativo, programas transcripcionales alterados y fenotipos de inestabilidad genómica observados en biología del cáncer y en otros modelos de enfermedades relacionadas con la cromatina.

CAF-1 p150 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHAF1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHAF1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHAF1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHAF1A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.