cadherin-22 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401942-ACT

CDH22 codifica a caderina-22, um recetor de adesão célula–célula dependente de cálcio pertencente à superfamília das caderinas, que sustenta a arquitetura dos tecidos por meio de interações homofílicas e do acoplamento às cateninas e ao citoesqueleto de actina. Ao modular a montagem das junções aderentes e a sinalização dependente de contacto, a caderina-22 pode influenciar a organização epitelial e neuronal, a polaridade celular e o comportamento migratório. Padrões alterados de expressão de caderinas estão frequentemente associados a adesão desregulada, fenótipos ligados à invasão e remodelação do microambiente tumoral, tornando o CDH22 um alvo relevante para estudos mecanísticos da comunicação célula–célula. A expressão de CDH22 também tem sido investigada em contextos de especificação de linhagem e diferenciação, nos quais a adesão mediada por caderinas se cruza com programas de desenvolvimento.

cadherin-22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH22 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cadherin-22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH22 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cadherin-22. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH22 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cadherin-22 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cadherin-22 em células tumorais com expressão de CDH22 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.