CAD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403028

Panoramica

DFFB codifica la DNasi attivata dalle caspasi (CAD), l’endonucleasi responsabile della frammentazione internucleosomiale del DNA durante l’apoptosi. Nelle cellule vitali, CAD è mantenuta inattiva grazie al legame con il suo inibitore e chaperone ICAD (DFFA) e viene attivata in seguito alla clivaggio di ICAD dipendente dalla caspasi-3, consentendo la degradazione della cromatina e lo smantellamento del nucleo apoptotico. Questa attività nucleasica collega le vie apoptotiche intrinseca ed estrinseca al controllo dell’integrità del genoma, assicurando un’eliminazione ordinata del DNA durante la morte cellulare programmata. La disregolazione della funzione CAD/ICAD può alterare l’esecuzione dell’apoptosi ed è stata studiata in contesti di trasformazione oncogena, omeostasi delle cellule immunitarie e degenerazione tissutale, in cui sono coinvolti programmi di morte cellulare alterati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CAD (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DFFB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DFFB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DFFB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CAD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DFFB per lo studio della segnalazione di CAD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DFFB critici per la funzione di CAD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DFFB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CAD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CAD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DFFB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CAD Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CAD (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DFFB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DFFB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.