Cacna2d1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402833-NIC

CACNA2D1 は、電位依存性カルシウムチャネルの補助サブユニットである α2δ-1 をコードしており、チャネルの輸送（トラフィッキング）、膜上での安定性、ならびにゲーティングを制御する主要な調節因子として、興奮性や刺激―分泌連関の際のカルシウム流入の形成に関与します。CaV チャネル機能を調節することで、Cacna2d1 は神経伝達物質放出、筋収縮、活動依存的な遺伝子発現に影響を与えるカルシウム依存性シグナル伝達カスケードに作用します。CACNA2D1 の発現変化やチャネル複合体の制御異常は、電気生理学的な破綻やリモデリング過程の異常と関連づけられており、神経科学および心血管研究の文脈で重要視されています。また Cacna2d1 はチャネル複合体の細胞表面に露出した構成要素であるため、細胞外での相互作用や翻訳後修飾がカルシウムチャネルの利用可能性をどのように調整するかを解析する上でも有用です。

Cacna2d1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CACNA2D1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CACNA2D1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CACNA2D1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CACNA2D1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。