Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CA IV Double Nickase Plasmid (h): sc-404215-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CA IV Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CA IV Double-Nickase-Plasmid (h) und CA IV Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CA4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CA IV: sc-74446
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CA IV Double Nickase Plasmid (h) | sc-404215-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA IV Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404215-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes **CA4** kodiert die Carboanhydrase IV (CA IV), ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes extrazelluläres Enzym, das an der Zelloberfläche die reversible Hydratisierung von CO₂ zu Bicarbonat und Protonen katalysiert. Durch die Regulation des lokalen pH-Werts und der Verfügbarkeit von Bicarbonat unterstützt CA IV die Säure‑Basen‑Homöostase und beeinflusst Ionentransportprozesse, die mit Natrium- und Chloridflüssen über Epithelien gekoppelt sind. Die Aktivität von CA4 ist an physiologischen Funktionen in Niere, Lunge und okulären Geweben beteiligt, in denen extrazelluläre Pufferung und CO₂‑Handhabung entscheidend sind. Eine dysregulierte Carboanhydrasefunktion sowie CA4-assoziierte Varianten wurden mit veränderten pH‑Mikromilieus und Pathophysiologie in Geweben in Verbindung gebracht, die hohe Anforderungen an Gasaustausch sowie Flüssigkeits‑/Soluttransport stellen.
CA IV Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CA4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.