C9orf152 Double Nickaseプラスミド (h): sc-415979-NIC

C9orf152は、機能注釈が限られており十分に特徴づけられていないヒトのタンパク質コード遺伝子で、現時点のエビデンスからは、特定の経路に限定された機能というよりも、基礎的な細胞制御に関与する可能性が示唆されています。発現プロファイリングや新たに蓄積しつつあるプロテオゲノミクスデータセットは、C9orf152を転写制御、RNA代謝、細胞ストレス応答といったより広範なプロセスの中で位置づけるのに役立ちます。未同定のオープンリーディングフレーム（ORF）遺伝子は状況依存的な必須性を示すことが多いため、C9orf152の撹乱は細胞種間での遺伝学的依存性をマッピングする上で有用です。こうした研究は、明確な病原性メカニズムを前提とせずに、機能ゲノミクスやバリアント解釈を通じて複雑疾患表現型との関連の可能性を検討することを後押しします。

C9orf152 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における C9orf152 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、C9orf152内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、C9orf152の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、C9orf152が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。