C9orf152 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-415979-ACT-2

ヒトC9orf152は、その機能の多くが未解明なタンパク質をコードしているが、発現パターンや共発現ネットワークの解析から核および細胞質での機能が示唆されており、細胞恒常性の維持や各種調節過程に関与する可能性を示す証拠が蓄積しつつある。トランスクリプトーム解析では、細胞周期制御やストレス応答に関連するシグナル伝達および遺伝子発現制御経路への関与が示唆され、注釈の乏しい調節ノードを解明するための有用な標的となり得る。さらに、がん関連プロファイルを含む疾患関連データセットにおいてC9orf152の発現変動が報告されており、転写プログラムの破綻や細胞適応の分子機構を検討する研究における重要性が示される。C9orf152を遺伝子編集することで、ノックアウトや特定変異の精密モデル化を通じて機能解析が可能となり、下流経路への影響、タンパク質相互作用ネットワーク、ならびにヒト細胞系における表現型—遺伝子型関係の解明に役立つ。

C9orf152 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C9orf152の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C9orf152 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における C9orf152 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC9orf152転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C9orf152の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC9orf152遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC9orf152依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC9orf152発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC9orf152経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。