C7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404773-ACT

O componente do complemento 7 (C7) codifica uma proteína terminal do complemento que se associa a C5b, C6, C8 e C9 para formar o complexo de ataque à membrana (MAC), um efetor formador de poros da imunidade inata. Por meio da ativação das vias clássica, das lectinas ou alternativa do complemento, o C7 contribui para a lise de patógenos, a depuração de complexos imunes e a modulação da sinalização inflamatória nas superfícies celulares. A atividade desregulada do complemento, incluindo o envolvimento aberrante da via terminal, está implicada em patologias inflamatórias e autoimunes e tem sido investigada em contextos como suscetibilidade a infecções e lesão tecidual mediada pelo complemento. Além da defesa antimicrobiana, a formação do MAC pode influenciar respostas de estresse celular e a produção de citocinas, relacionando a biologia do C7 a uma homeostase imune mais ampla.

C7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C7 em células tumorais com expressão de C7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.