C20orf54 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405094-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- C20orf54 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- C20orf54ダブルニカースプラスミド（h）およびC20orf54ダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC52A3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
C20orf54 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405094-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C20orf54 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405094-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC52A3（別名C20orf54）は、高親和性のリボフラビン輸送体をコードしており、フラボタンパク質依存性の酸化還元反応に必要なFMNおよびFADの前駆体であるビタミンB2（リボフラビン）を細胞内へ取り込む役割を担います。フラビン補酵素の利用可能性を維持することで、C20orf54はミトコンドリアの酸化的代謝、脂肪酸β酸化、ならびにより広範な細胞内の酸化還元恒常性を支えています。SLC52A3の活性変化は、リボフラビン輸送体欠損症にみられる表現型や、フラビン依存性経路の障害に関連する神経発達および神経筋機能の異常と関連づけられています。がん生物学の分野では、SLC52A3の発現が、補因子供給や酸化ストレス応答に影響する代謝的決定因子として検討されています。
C20orf54 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC52A3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC52A3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC52A3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC52A3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。