C1q-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419388

Panoramica

C1qc codifica la catena C del componente del complemento C1q, una molecola di riconoscimento che avvia la via classica del complemento tramite l’associazione con C1r e C1s e il legame a complessi immuni, cellule apoptotiche e self alterato. Nel topo, C1q contribuisce alla sorveglianza immunitaria innata promuovendo l’opsonizzazione, la rimozione fagocitica e la modulazione della segnalazione infiammatoria, con effetti a valle sull’attivazione della cascata del complemento e sulle reti citochiniche. I processi dipendenti da C1q-C sono spesso studiati nella biologia dei macrofagi e della microglia, inclusi il rimodellamento sinaptico e l’omeostasi tissutale, dove il marcamento mediato dal complemento può influenzare i meccanismi cellulari di pruning e di clearance. Un’attività di C1q e un’attivazione del complemento deregolate sono collegate a fenotipi infiammatori e neuroimmuni rilevanti per modelli di ricerca su autoimmunità, risposte alle infezioni e neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C1q-C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C1qc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C1qc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C1qc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C1q-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C1qc per lo studio della segnalazione di C1q-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C1qc critici per la funzione di C1q-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C1qc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C1q-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C1q-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C1qc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C1q-C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C1q-C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C1qc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C1qc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.