Particules Lentivirales d'Activation (h2) C1orf115: sc-413237-LAC-2

Le gène humain C1orf115 code une protéine encore peu caractérisée et faiblement annotée sur le plan fonctionnel, décrite principalement à partir d’analyses transcriptomiques et protéomiques plutôt que par une activité biochimique clairement définie. Les données disponibles suggèrent que C1orf115 pourrait participer à des programmes de régulation dépendants de l’état cellulaire, avec des profils d’expression laissant entrevoir des rôles dans des processus fondamentaux tels que la différenciation cellulaire, les réponses au stress et, plus largement, des réseaux de contrôle transcriptionnel ou post-transcriptionnel. Des modifications de l’expression de C1orf115 ont été observées dans des jeux de données associés à des maladies, ce qui soutient son intérêt comme gène candidat pour des études mécanistiques des dérégulations de l’expression génique dans des troubles complexes, y compris des signatures pertinentes en cancérologie. L’édition du gène C1orf115 permet d’effectuer des analyses ciblées de perte ou de gain de fonction afin de cartographier la connectivité des voies, d’identifier des partenaires d’interaction et de valider des relations génotype–phénotype dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales C1orf115 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de C1orf115 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales C1orf115 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription C1orf115, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de C1orf115. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif C1orf115 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.