C1orf115 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413237-ACT

C1orf115（ヒト）は機能注釈が限られた、十分に特徴づけられていないタンパク質をコードしており、その役割は状況依存的で、攪乱（perturbation）実験によって最も明確になる可能性が示唆されます。利用可能なトランスクリプトームおよびプロテオームのデータセットからは細胞種特異的な発現パターンが示されており、系譜分化、ストレス適応プログラム、その他の制御された細胞状態における検討が支持されます。主要なシグナル伝達経路との機序的な結び付きはなお十分に定義されていないため、C1orf115の発現を調節することは、下流の転写応答やタンパク質相互作用ネットワークをマッピングするうえで有用です。C1orf115のような未解明のオープンリーディングフレーム（ORF）の発現変動シグネチャは、がんおよび神経生物学のデータセットでしばしば調査対象となっており、因果関係を前提とせずに疾患関連経路を探索的に研究する際にも関連性があります。

C1orf115 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C1orf115の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C1orf115 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C1orf115 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC1orf115転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C1orf115の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC1orf115遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC1orf115依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC1orf115発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC1orf115経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。